microRNA过表达载体构建技术的实验研究

摘要：目的：构建microRNA的表达载体，再转染生物体细胞观察该microRNA的转录或表达情况，以获知它的作用机理及对生物体的影响。方法：以microRNA-21（简化为miR-21）为例说明构建表达载体的方法。根据microRNA的成熟序列以及附近约200多碱基共约470个碱基序列，设计PCR引物，PCR扩增，PCR产物和pcDNA3.1（＋）质粒双酶切后，用T4连接酶进行连接反应，并转化入感受态细胞，筛选后对重组质粒进行双酶切、琼脂糖凝胶电泳鉴定及测序分析，并将其转染 Hela细胞，经 RT-PCR实验检测其表达情况。结果：pcDNA3.1（＋）/miR-21过表达载体转染细胞后使得miR-21在细胞中过表达。结论：成功构建了miR-21的真核表达载体，为进一步研究miR-21功能及作用机制奠定实验基础。